In questo lavoro, per la prima volta, una birra Gruyt e la stessa birra dopo l’aggiunta di olio essenziale di Citrus aurantium (AEO) sono state studiate per determinarne la composizione della frazione volatile. Le tecniche analitiche applicate, come la microestrazione in fase solida nello spazio di testa (HS/SPME) accoppiata alla gascromatografia-spettrometria di massa (GC-MS) e la spettrometria di massa a tempo di volo con reazione di trasferimento protonico (PTR-ToF-MS), hanno permesso di identificare il contenuto di composti organici volatili (COV). Dal confronto tra i due campioni di birra, è emerso che quello con l’aggiunta di AEO era particolarmente ricco di limonene e di una serie di composti terpenici minori. L’AEO è stato inoltre caratterizzato mediante analisi GC/MS e i risultati hanno mostrato che il limonene raggiungeva il 95%. La microscopia confocale è stata utilizzata per osservare l’autofluorescenza della riboflavina nelle cellule di lievito. È stato riscontrato che la birra con AEO presentava un’intensità di fluorescenza doppia rispetto al controllo. Sono state inoltre effettuate un’analisi spettrofotometrica dei polifenoli totali, dei tannini e dei flavonoidi, nonché uno screening della bioattività, inclusi gli scavenger dei radicali 2,2-difenil-1-picrilidrazile (DPPH) e 2,2′-azinobis-(3-etilbenzotiazolin-6-acido solfonico) (ABTS), chelanti, riducenti e antiglicativi. Inoltre, è stata valutata la tollerabilità dei campioni testati nei colangiociti umani H69 e la citoprotezione nei confronti del danno ossidativo indotto dal tert-butil idroperossido (tBOOH). Nelle nostre condizioni sperimentali, le birre si sono dimostrate in grado di neutralizzare i radicali DPPH e ABTS e di chelare gli ioni ferro, nonostante le deboli proprietà antiglicative e riducenti.
I campioni testati non hanno influenzato la vitalità dei colangiociti H69 fino alle concentrazioni più elevate; Inoltre, non sono stati evidenziati segni di citoprotezione contro il danno indotto dal tBOOH. L’aggiunta di AEO alla birra ha determinato un moderato miglioramento delle sue capacità di neutralizzazione del DPPH e di chelazione, senza miglioramenti negli altri test. Al contrario, l’AEO e il suo principale composto, il limonene, si sono rivelati inefficaci alle concentrazioni aggiunte alla birra. Questa evidenza suggerisce che l’aggiunta di AEO potrebbe migliorare le caratteristiche organolettiche della birra e potenziare leggermente alcune delle sue bioattività.
Spettri di emissione di autofluorescenza della riboflavina rilevati su cellule di lievito. (L’intensità di fluorescenza relativa alla riboflavina riscontrata nella birra arricchita con AEO è risultata doppia rispetto al controllo).
Capacità chelanti del ferro della birra, della birra + 0,025% v/v di AEO e dell’AEO e del suo principale composto limonene alle corrispondenti concentrazioni nella birra. (A) Chelazione degli ioni ferrosi da parte dei campioni di birra e del controllo positivo quercetina. (B) Chelazione degli ioni ferrosi da parte di AEO, limonene e del controllo positivo quercetina. (C) Chelazione degli ioni ferrici da parte dei campioni di birra e del controllo positivo quercetina. (D) Chelazione degli ioni ferrici da parte di AEO, limonene e del controllo positivo quercetina.
Effetto della birra, della birra + 0,025% v/v di AEO, dell’AEO e del suo principale composto limonene alle corrispondenti concentrazioni nella birra sulla vitalità cellulare (A,C) e sulle specie reattive dell’ossigeno intracellulari (B,D) influenzate dal tert-butil idroperossido (tBOOH) in cellule di colangiociti intraepatici non cancerosi H69. Le cellule sono state trattate con i campioni per 24 ore e poi con tBOOH per ulteriori 3 ore. I dati sono presentati come media ± SEM (n = 9). (A,B) Campioni di birra. (C,D) AEO e il suo principale composto limonene.